مصنوعات
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR ڈیٹیکشن کٹ برائے 2019-nCoV
متوقع استعمال
یہ کٹ نئے کورونا وائرس (2019-nCoV) کی گتاتمک شناخت کے لیے گلے کے جھاڑو، ناسوفرینجیل سویبس، برونکولویولر لیویج فلوئڈ، تھوک کے استعمال کے لیے استعمال کی جاتی ہے۔ اس پروڈکٹ کا پتہ لگانے کا نتیجہ صرف طبی حوالے کے لیے ہے، اور اسے صرف ایک کے طور پر استعمال نہیں کیا جانا چاہیے۔ طبی تشخیص اور علاج کے ثبوت۔ مریض کے طبی مظاہر اور دیگر لیبارٹری ٹیسٹوں کے ساتھ مل کر حالت کا ایک جامع تجزیہ تجویز کیا جاتا ہے۔
معائنہ کا اصول
کٹ ایک قدمی RT-PCR ٹیکنالوجی پر مبنی ہے۔درحقیقت، 2019 کے نئے کورونا وائرس (2019-nCoV) ORF1ab اور N جینز کو ایمپلیفیکیشن ٹارگٹ ریجنز کے طور پر منتخب کیا گیا تھا۔مخصوص پرائمر اور فلوروسینٹ پروبس (N جین پروبس پر FAM اور ORF1ab پروبس پر HEX کا لیبل لگا ہوا ہے) نمونوں میں 2019 کے نئے قسم کے کورونا وائرس RNA کا پتہ لگانے کے لیے ڈیزائن کیے گئے ہیں۔اس کٹ میں نمونہ جمع کرنے، آر این اے اور پی سی آر ایمپلیفیکیشن کے عمل کی نگرانی کے لیے ایک اینڈوجینس اندرونی کنٹرول کا پتہ لگانے کا نظام (اندرونی کنٹرول جین پروب جس پر CY5 کا لیبل لگا ہوا ہے) بھی شامل ہے، اس طرح غلط منفی نتائج کو کم کیا جا سکتا ہے۔
اہم اجزاء
| اجزاء | حجم(48T/Kit) |
| RT-PCR رد عمل کا حل | 96µl |
| nCOV پرائمر TaqMan probemixture（ORF1ab، N Gene، RnaseP جین） | 864µl |
| منفی کنٹرول | 1500µl |
| nCOV مثبت کنٹرول (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
اپنے ریجنٹس: آر این اے نکالنے یا صاف کرنے والے ریجنٹس۔منفی/مثبت کنٹرول: مثبت کنٹرول آر این اے ہے جس میں ہدف کے ٹکڑے ہوتے ہیں، جبکہ منفی کنٹرول نیوکلک ایسڈ سے پاک پانی ہے۔استعمال کے دوران، انہیں نکالنے میں حصہ لینا چاہئے اور انہیں متعدی سمجھا جانا چاہئے۔انہیں متعلقہ ضوابط کے مطابق ہینڈل اور نمٹا جانا چاہیے۔
اندرونی حوالہ جین انسانی RnaseP جین ہے۔
اسٹوریج کی شرائط اور میعاد ختم ہونے کی تاریخ
-20±5℃، بار بار جمنے اور 5 بار سے زیادہ پگھلنے سے گریز کریں، 6 ماہ کے لیے درست۔
قابل اطلاق آلہ
FAM/HEX/CY5 اور دیگر ملٹی چینل فلوروسینٹ PCR انسٹرومنٹ کے ساتھ۔
نمونہ کی ضروریات
1. قابل اطلاق نمونہ کی اقسام: گلے کے جھاڑو، ناسوفرینجیل جھاڑو، برونچوئلولر لیویج سیال، تھوک۔
2. نمونہ جمع کرنا (ایسپٹک تکنیک)
فارینجیل سویب: ٹانسلز اور کولہوں کی گردن کی دیوار کو ایک ہی وقت میں دو جھاڑو سے صاف کریں، پھر جھاڑو کے سر کو ایک ٹیسٹ ٹیوب میں ڈبو دیں جس میں نمونے لینے کا محلول موجود ہو۔
تھوک: مریض کو گہری کھانسی ہونے کے بعد، کھانسی والے تھوک کو اسکرو کیپ ٹیسٹ ٹیوب میں جمع کریں جس میں نمونے لینے کا محلول ہو۔برونکولوولر لیویج فلوئڈ: طبی پیشہ ور افراد کے ذریعہ نمونے لینا۔3. نمونے کی اسٹوریج اور نقل و حمل
وائرس کی تنہائی اور آر این اے ٹیسٹنگ کے نمونوں کی جلد از جلد جانچ کی جانی چاہیے۔نمونے جو 24 گھنٹوں کے اندر اندر پائے جا سکتے ہیں 4℃ پر ذخیرہ کیے جا سکتے ہیں۔جن کا 24 کے اندر پتہ نہیں چل سکتا
گھنٹے کو -70℃ یا اس سے نیچے ذخیرہ کیا جانا چاہیے (اگر -70℃ کی کوئی سٹوریج کی حالت نہیں ہے، تو انہیں ہونا چاہیے
عارضی طور پر -20℃ ریفریجریٹر میں ذخیرہ کیا جاتا ہے)۔نقل و حمل کے دوران نمونوں کو بار بار جمنے اور پگھلنے سے گریز کرنا چاہیے۔نمونے جمع کرنے کے بعد جلد از جلد لیبارٹری بھیجے جائیں۔اگر نمونوں کو طویل فاصلے پر لے جانے کی ضرورت ہو تو، خشک برف ذخیرہ کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔
ٹیسٹ کے طریقے
1 نمونہ پروسیسنگ اور آر این اے نکالنے (نمونہ پروسیسنگ ایریا)
RNA نکالنے کے لیے 200μl مائع نمونہ لینے کی سفارش کی جاتی ہے۔متعلقہ نکالنے کے اقدامات کے لیے، کمرشل RNA نکالنے والی کٹس کی ہدایات دیکھیں۔منفی اور منفی دونوں
اس کٹ میں کنٹرول نکالنے میں شامل تھے۔
2 پی سی آر ریجنٹ کی تیاری (ریجنٹ کی تیاری کا علاقہ)
2.1 کٹ سے تمام اجزاء کو ہٹا دیں اور کمرے کے درجہ حرارت پر پگھلا کر مکس کریں۔استعمال سے پہلے چند سیکنڈ کے لیے 8,000 rpm پر سینٹری فیوج؛ری ایجنٹس کی مطلوبہ مقدار کا حساب لگائیں، اور رد عمل کا نظام تیار کیا گیا ہے جیسا کہ درج ذیل جدول میں دکھایا گیا ہے۔
| اجزاء | N سرونگ (25µl سسٹم) |
| nCOV پرائمر TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR رد عمل کا حل | 2 µl × N |
| *N = جانچے گئے نمونوں کی تعداد + 1 (منفی کنٹرول) + 1 (nCOVمثبت کنٹرول) | |
2.2 اجزاء کو اچھی طرح مکس کرنے کے بعد، تھوڑی دیر کے لیے سینٹری فیوج کریں تاکہ ٹیوب کی دیوار پر موجود تمام مائع کو ٹیوب کے نیچے گرنے دیا جائے، اور پھر 20 μl ایمپلیفیکیشن سسٹم کو پی سی آر ٹیوب میں ڈالیں۔
3 نمونے لینے (نمونے کی تیاری کا علاقہ)
نکالنے کے بعد 5μl منفی اور مثبت کنٹرول شامل کریں۔ٹیسٹ کیے جانے والے نمونے کا آر این اے پی سی آر ری ایکشن ٹیوب میں شامل کیا جاتا ہے۔
ٹیوب کو مضبوطی سے کیپ کریں اور اسے ایمپلیفیکیشن ڈیٹیکشن ایریا میں منتقل کرنے سے پہلے چند سیکنڈ کے لیے 8,000 rpm پر سینٹرفیوج کریں۔
4 پی سی آر ایمپلیفیکیشن (ایمپلیفائیڈ ڈیٹیکشن ایریا)
4.1 ری ایکشن ٹیوب کو آلے کے سیمپل سیل میں رکھیں، اور پیرامیٹرز کو اس طرح سیٹ کریں:
| مرحلہ | سائیکل نمبر | درجہ حرارت(°C) | وقت | مجموعہسائٹ |
| معکوسنقل | 1 | 42 | 10 منٹ | - |
| پری ڈینیچریشنn | 1 | 95 | 1 منٹ | - |
| سائیکل | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | ڈیٹا اکٹھا کرنا |
آلہ کا پتہ لگانے والے چینل کا انتخاب: فلوروسینس سگنل کے لیے FAM、HEX、CY5 چینل کا انتخاب کریں۔حوالہ فلوروسینٹ NONE کے لیے، براہ کرم ROX کا انتخاب نہ کریں۔
5 نتائج کا تجزیہ (براہ کرم ترتیب کے لیے ہر آلے کی تجرباتی ہدایات دیکھیں)
ردعمل کے بعد، نتائج کو محفوظ کریں.تجزیہ کے بعد، تصویر کے مطابق ابتدائی قیمت، اختتامی قدر، اور بیس لائن کی حد کی قدر کو ایڈجسٹ کریں (صارف اصل صورت حال کے مطابق ایڈجسٹ کر سکتا ہے، ابتدائی قیمت 3~15 پر سیٹ کی جا سکتی ہے، اختتامی قدر کو سیٹ کیا جا سکتا ہے 5~20، ایڈجسٹمنٹ) لوگاریتھمک گراف میں ونڈو کی دہلیز پر، تھریشولڈ لائن لوگارتھمک مرحلے میں ہے، اور منفی کنٹرول کا ایمپلیفیکیشن وکر ایک سیدھی لائن ہے یا تھریشولڈ لائن سے نیچے)۔
6 کواٹی کنٹرول （ایک طریقہ کار کنٹرول ٹیسٹ میں شامل ہے） منفی کنٹرول: FAM، HEX، CY5 کا پتہ لگانے والے چینلز کے لئے کوئی واضح ایمپلیفیکیشن وکر نہیں
COV مثبت کنٹرول: FAM اور HEX کا پتہ لگانے والے چینلز کا واضح ایمپلیفیکیشن وکر، Ct value≤32، لیکن CY5 چینل کا کوئی ایمپلیفیکیشن وکر نہیں؛
مندرجہ بالا تقاضوں کو ایک ہی تجربے میں ایک ساتھ پورا کیا جانا چاہیے؛بصورت دیگر، تجربہ غلط ہے اور اسے دہرانے کی ضرورت ہے۔
7 نتائج کا تعین۔
7.1 اگر ٹیسٹ کے نمونے کے FAM اور HEX چینلز میں ایمپلیفیکیشن وکر یا Ct ویلیو> 40 نہیں ہے، اور CY5 چینل میں ایمپلیفیکیشن وکر ہے، تو یہ اندازہ لگایا جا سکتا ہے کہ کوئی 2019 نیا کورونا وائرس نہیں ہے (2019-nCoV) نمونے میں آر این اے؛
.2 اگر ٹیسٹ کے نمونے میں FAM اور HEX چینلز میں واضح ایمپلیفیکیشن کروز ہیں، اور Ct قدر ≤40 ہے، تو یہ اندازہ لگایا جا سکتا ہے کہ نمونہ 2019 کے نئے کورونا وائرس (2019-nCoV) کے لیے مثبت ہے۔
7.3 اگر ٹیسٹ کے نمونے میں FAM یا HEX کے صرف ایک چینل میں واضح ایمپلیفیکیشن وکر ہے، اور Ct ویلیو ≤40 ہے، اور دوسرے چینل میں کوئی ایمپلیفیکیشن وکر نہیں ہے، تو نتائج کو دوبارہ جانچنے کی ضرورت ہے۔اگر دوبارہ ٹیسٹ کے نتائج یکساں ہیں، تو نمونے کو نئے کے لیے مثبت قرار دیا جا سکتا ہے۔
کورونا وائرس 2019 (2019-nCoV)۔اگر دوبارہ ٹیسٹ کا نتیجہ منفی ہے، تو یہ اندازہ لگایا جا سکتا ہے کہ نمونہ 2019 کے نئے کورونا وائرس (2019-nCoV) کے لیے منفی ہے۔
مثبت فیصلے کی قدر
کٹ کی حوالہ سی ٹی ویلیو کا تعین کرنے کے لیے ROC وکر کا طریقہ استعمال کیا جاتا ہے اور اندرونی کنٹرول ریفرنس ویلیو 40 ہے۔
ٹیسٹ کے نتائج کی تشریح
1.ہر تجربے کو منفی اور مثبت کنٹرول کے لیے ٹیسٹ کیا جانا چاہیے۔ٹیسٹ کے نتائج کا تعین صرف اس وقت کیا جا سکتا ہے جب کنٹرولز کوالٹی کنٹرول کے تقاضوں کو پورا کرتے ہیں۔
2. جب FAM اور HEX پتہ لگانے والے چینل مثبت ہوتے ہیں، CY5 چینل (اندرونی کنٹرول چینل) کا نتیجہ سسٹم کے مقابلے کی وجہ سے منفی ہو سکتا ہے۔
3. جب اندرونی کنٹرول کا نتیجہ منفی ہے، اگر ٹیسٹ ٹیوب کے FAM اور HEX پتہ لگانے والے چینلز بھی منفی ہیں، تو اس کا مطلب ہے کہ سسٹم غیر فعال ہے یا آپریشن غلط ہے، t ٹیسٹ غلط ہے۔لہذا، نمونوں کو دوبارہ جانچنے کی ضرورت ہے۔
